NK細胞分選試劑盒可用于從小鼠脾臟單細胞懸液中分離未經標記的NK 細胞。非NK細胞(T細胞、DC 細胞、B細胞、粒細胞、巨噬細胞、紅系細胞)被生物素化的抗體和識別生物素的磁珠標記通過去除這些非NK細胞，從而得到高純度的NK細胞。
其分選原理為：用生物素結合的單克隆抗體混合物(作為一級標記試劑)和與磁珠結合的抗生物素單克隆抗體(作為二級標記試劑)對非靶細胞進行間接磁性標記。磁性標記的非目標細胞在分選器的磁場中被保留在分選柱中，而未標記的NK 細胞則通過分選柱流出。
試劑和儀器要求
緩沖液（pH7.2 PBS，0.5% BSA、2mM EDTA， 2~8℃）
分選柱和分選器。
(可選)熒光偶聯的抗體用于流式分析。
(可選)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死細胞。
(可選)死細胞清除試劑盒用于死細胞的清除。
(可選)預分離過濾器去除細胞團塊。
操作步驟
一、樣本準備
使用手動方法或組織解離器制備脾臟單細胞懸液。
二、磁珠標記
1.細胞計數。
2.300xg離心10分鐘。去除上清。
3.每107個細胞總量使用 40μL緩沖液重懸。
4.每107個細胞總量添加 10μLNK細胞生物素抗體混合物。
5.混勻，2-8℃孵育 5分鐘。
6.每107個細胞加入 2mL緩沖液洗滌細胞，300xg離心10分鐘，去上清。
7.每107個細胞添加 80μL 緩沖液。
8.每107個細胞添加 20μL抗生物素磁珠。
9.混勻，2-8℃孵育 10分鐘。
10.(可選)添加染色抗體。
11.進行細胞分選步驟。
三、細胞分選
xM或xL分選柱進行細胞分選
1.將分選柱置于相對應的分選器中。
2.用適當體積的緩沖液潤洗分選柱（xM: 500 μL； xL: 3mL）
3.將細胞懸液轉移至分選柱中。收集含有未標記細胞的流出液，即 NK細胞。
4.加適量的緩沖液，收集總流出物，并與步驟 3中的流出液混合，這是NK細胞。（ xM: 500 μL；xL: 3mL）
5.(可選 )將分選柱從分選器中取出，并將其放在合適的收集管上。加適量的緩沖液到分選柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性標記的非NK細胞。（ xM: 1mL；xL: 5mL）
儲存溫度
2-8℃避光保存，請勿冷凍。有效期見試劑外標簽。
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